Analisis PCR untuk interpretasi kualitatif hepatitis C dari hasil

Mengingat perjalanan tanpa gejala dan kemungkinan tinggi penularan infeksi HCV, diagnosis pada tahap awal patologi sangat penting. Yang paling akurat adalah formulasi reaksi berantai polimerase. Tidak seperti metode untuk mendeteksi penanda serologis, PCR sedikit tergantung pada penyakit yang menyertai dan kondisi umum tubuh pasien. Tetapi jika virus hepatitis C dikonfirmasi, analisis kuantitatif, yang decoding yang dilakukan oleh dokter, adalah wajib.

HCV adalah penyakit serius yang membutuhkan reaksi merugikan perawatan yang mahal dan berbahaya. Karena itu, diagnosis tidak pernah dibuat berdasarkan hasil satu penelitian. Jika dicurigai penyakit virus, pasien harus menjalani beberapa tes. Tetapi untuk menghindari biaya yang tidak perlu dan kehilangan waktu, tes darah dan pemeriksaan instrumen dilakukan secara bertahap.

Tahapan utama dari proses diagnostik ditunjukkan pada tabel:

Penelitian yang sedang berlangsungTujuan kinerja
Analisis biokimia dari tes darah dan hatiMemungkinkan Anda untuk mengevaluasi aktivitas fungsional hati, tingkat bilirubin, indikator transaminase hati. Melampaui norma sebanyak 2 kali atau lebih mengindikasikan adanya penyakit
Tes klinis darah, urin, dan fesesStudi-studi ini tidak spesifik, tetapi hasilnya dapat menentukan adanya proses inflamasi, menilai kondisi umum pasien. Deteksi bilirubin dalam urin, perubahan warna tinja berbicara mendukung kerusakan hati
Uji imunosorben terkait-enzim (ELISA)Ini memungkinkan Anda untuk menentukan keberadaan infeksi virus dalam tubuh dan bentuknya (akut atau kronis). Kerugian dari penelitian ini adalah kemungkinan hasil yang salah.
Reaksi berantai polimeraseMahal, sulit dilakukan, tetapi pada saat yang sama metode diagnostik yang paling akurat untuk HCV. Ini memungkinkan Anda untuk mengkonfirmasi keberadaan virus dalam tubuh manusia, mengukur tingkat salinan RNA, menentukan genotipe HCV
Pemeriksaan instrumental pada hatiHal ini diperlukan untuk melakukan USG organ perut, menetapkan tahap fibrosis, menilai keparahan sirosis, tidak termasuk karsinoma hepatoseluler

Dokter membuat diagnosis akhir hanya sesuai dengan hasil yang ditunjukkan dalam semua penelitian. Beberapa obat, misalnya, hepatoprotektor, vitamin ditunjukkan sudah pada awal proses diagnostik. Tetapi agen antivirus yang ditargetkan diresepkan setelah menerima semua data.

Apa itu PCR?

Teknik reaksi berantai polimerase telah dikenal sejak lama dan telah berhasil digunakan untuk mendiagnosis sejumlah penyakit virus, dan HCV tidak terkecuali.

Saat ini, ada beberapa metode untuk mengatur PCR, tetapi pada prinsipnya proses ini terdiri dari beberapa tahap:

  1. Penghancuran untai ganda DNA di bawah pengaruh panas atau bahan kimia tertentu.
  2. Bergabung dengan apa yang disebut primer, residu dari rantai nukleotida RNA virus, hingga DNA yang dipisahkan oleh basis DNA (dalam sebagian besar sistem pengujian modern, daerah 5`-NTR dari genom HCV digunakan).
  3. Enzim tertentu, DNA polimerase, mengenali primer, memicu penambahan residu nukleotida lainnya.

Pada akhir tahap ketiga dari reaksi berantai polimerase, DNA antara dua primer berlipat ganda, dan selanjutnya, genom diamplifikasi secara eksponensial (2-4–8, dll.).

Sensitivitas sistem tes modern adalah 10-50 salinan RNA dalam 1 ml darah.

Penguraian PCR untuk hepatitis C harus dilakukan oleh spesialis yang berkualifikasi. Sesuai dengan WHO International Standard, sampel plasma darah dalam bentuk lyophilized yang mengandung RNA genotipe virus pertama pada konsentrasi 105 IU / ml digunakan untuk mengukur genom virus.

Pada saat yang sama, perhatian ditujukan pada unit kuantitatif di mana hasil penelitian diungkapkan. Biasanya, jumlah salinan RNA HCV ditunjukkan dalam istilah absolut atau logaritmik. Kemudian, sesuai dengan standar internasional, angka ini dikonversi menggunakan koefisien khusus menjadi unit internasional (IU). Dengan demikian, hasil akhir ditunjukkan dalam IU / ml.

Untuk melakukan studi kuantitatif, berbagai sistem uji dan metode untuk perumusan reaksi berantai polimerase digunakan. Beberapa dirancang untuk mengukur viremia plasma atau serum. Yang lain lebih efektif dan indikatif dalam penelitian darah lengkap..

Berbicara tentang norma ketika menafsirkan hasil yang ditunjukkan dalam formulir laboratorium tidak sepenuhnya benar. Faktanya adalah bahwa pada orang yang sehat tidak ada virus RNA dalam tubuh, dan keberadaan partikel HCV, terlepas dari indikator kuantitatif, mengindikasikan infeksi. Di masa depan, menggunakan PCR untuk mengevaluasi efektivitas pengobatan. Dengan hasil negatif pada 4 minggu minum obat, dan kemudian setelah akhir terapi antivirus (selama 48 minggu), mereka berbicara tentang pemulihan.

Jenis penelitian

Melakukan reaksi berantai polimerase tidak hanya menentukan keberadaan RNA HCV dalam darah, tetapi juga menentukan jumlah salinan virus dan menganalisis struktur genom. Kemampuan seperti itu menjadikan PCR salah satu metode yang paling informatif dan akurat untuk mendiagnosis virus hepatitis C.

Semua metode praktis untuk perumusan reaksi berantai polimerase diberikan di bawah ini dalam urutan perilaku (setiap tes berikutnya ditentukan dengan hasil positif dari yang sebelumnya):

  1. Analisis PCR berkualitas tinggi untuk hepatitis C dilakukan hanya untuk mendeteksi virus RNA dalam darah.
  2. Uji PCR kuantitatif. Dekripsi dilakukan sesuai dengan standar yang diterima secara umum. Tergantung pada hasilnya, beban virologi mungkin rendah, sedang atau tinggi. Indikator ini adalah salah satu prediktor hasil pengobatan HCV..
  3. Genotyping (di banyak laboratorium swasta ditawarkan bersamaan dengan analisis kuantitatif, yang mengurangi total biaya). Penunjukan genotipe HCV dilakukan oleh salah satu angka Arab (1 hingga 6). Di wilayah Rusia, genotipe 1 atau 3 lebih sering terdeteksi, agak lebih jarang - 2, 4–6 didiagnosis dalam kasus terisolasi. Sebelumnya, ketika menggunakan rejimen pengobatan interferon, berbagai HCV menentukan durasi dan efektivitas terapi. Agen antivirus modern memiliki spektrum aksi yang luas, tetapi beberapa dari mereka hanya diresepkan dengan 1-4 genotipe HCV.

Genotipe dilakukan hanya sekali, sebelum memulai terapi. Saat minum obat, norma-norma kuantitatif hepatitis C diperlukan untuk dokter untuk mengevaluasi efektivitas obat antivirus. Setelah pengobatan, studi PCR kualitatif dilakukan..

Fitur analisis kuantitatif

Analisis kuantitatif oleh PCR dilakukan untuk menentukan viral load. Dengan istilah ini berarti jumlah salinan RNA dari patogen dalam 1 ml darah.

Berkat penelitian semacam itu, dokter akan dapat mengevaluasi sejumlah faktor yang memainkan peran kunci baik dalam perjalanan penyakit dan dalam hasil terapi. Itu:

  • kemungkinan komplikasi (sirosis dan karsinoma hepatoseluler), karena semakin aktif proses patologis, semakin tinggi risiko patologi hati pada tahap awal hepatitis C;
  • keefektifan rejimen pengobatan standar (dalam kasus yang parah, diperlukan resep tambahan antivirus);
  • risiko bagi orang lain (terutama jika pasien milik segmen populasi yang aman secara sosial, memiliki keluarga, anak-anak);
  • risiko komplikasi ekstrahepatik (perkembangan penyakit autoimun, kerusakan saraf, sistem kardiovaskular, dll.).

Kuantifikasi RNA HCV juga penting untuk memantau efektivitas pengobatan. Ketika Anda terus menggunakan obat antivirus, angka yang Anda terima berkurang. Tujuan terapi adalah untuk mencapai hasil negatif dari analisis kualitatif oleh PCR..

Indikasi

Sebelum munculnya sejumlah besar laboratorium swasta, di mana pasien dapat mengambil hampir semua analisis tanpa dokumen dari dokter, arah untuk melakukan PCR kuantitatif diberikan pada tahap diagnosis atau perawatan tertentu..

Sesuai dengan standar dan protokol WHO, indikasi untuk penelitian tersebut adalah:

  • penanda serologis positif HCV (Total anti-HCV, adanya imunoglobulin kelas G dan / atau M);
  • hasil positif dari PCR berkualitas tinggi;
  • pemantauan pengobatan.

Jika diinginkan, pasien dapat secara mandiri beralih ke klinik swasta dan melakukan penelitian serupa. Tetapi dengan tidak adanya hepatitis C, tes laboratorium semacam itu dianggap tidak pantas.

Apa tahapan penyakit kita?

Untuk menentukan viral load, tanggal berikut:

  • sebelum memulai pengobatan (mungkin bersamaan dengan genotipe);
  • 4 minggu pengobatan (data negatif menunjukkan tanggapan virologi cepat dan memprediksi hasil prediksi);
  • minggu terakhir dari kursus terapi (12 atau 24, tergantung pada skema yang dipilih), hasil negatif mengkonfirmasi efektivitas terapi, yang positif memerlukan perawatan lebih lanjut, tetapi dengan penggunaan obat-obatan lain;
  • 24 dan 48 minggu setelah berakhirnya pengobatan (terlepas dari durasinya), tidak adanya viral load mengkonfirmasi pemulihan.

Selain itu, penelitian ini dilakukan hanya berdasarkan indikasi (misalnya, penurunan kesehatan, kesalahan dalam mengambil tablet, identifikasi infeksi bersamaan, dll.). PCR tidak mengesampingkan kebutuhan untuk analisis lain - studi klinis darah dan urin, tes hati, USG dan lainnya.

Bagaimana mempersiapkan diri untuk belajar

Agar decoding dari analisis PCR tidak menjadi salah, perlu untuk mempersiapkan pengambilan sampel darah dengan benar. Dengan beberapa pengecualian, aturan tidak berbeda dari yang ada di penelitian lain..

Itu perlu:

  • donasi darah dengan ketat saat perut kosong (makan terakhir 12 jam sebelum mengunjungi laboratorium);
  • prosedur dilakukan di pagi hari (sedini mungkin);
  • pada hari analisis, setelah bangun tidur, Anda hanya bisa minum air putih; teh, kopi, soda dan / atau minuman manis, jus, dll. kontraindikasi;
  • 3-5 jam sebelum mendonorkan darah Anda tidak bisa merokok;
  • jika tidak mungkin untuk berhenti minum obat apa pun, beri tahu nama obat untuk dibawa ke asisten laboratorium dan dokter yang akan menginterpretasikan data.

Kehadiran hepatitis C sudah menyiratkan penolakan total terhadap alkohol dan diet ketat (tabel No. 5). Tetapi jika analisis dilakukan pada tahap diagnosis, 5-7 hari sebelum pengambilan sampel darah, pemantauan nutrisi wajib dilakukan dengan pengecualian produk hati dan alkohol..

Menguraikan analisis kuantitatif untuk hepatitis C

Biasanya, ketika pasien menerima hasil tes di tangan, formulir menampilkan nilai normal, nilai yang diperoleh dan interpretasi singkat. Namun, penguraian tes darah untuk hepatitis C hanya boleh dilakukan oleh dokter. PCR kuantitatif adalah salah satu tahap diagnosis, oleh karena itu, dokter membandingkan angka dengan hasil yang diperoleh sebelumnya.

Bergantung pada indikator yang diperoleh, tingkat viral load atau tidak adanya HCV RNA dalam tubuh ditentukan.

Jika analisis kuantitatif untuk hepatitis C dilakukan, dekripsi dilakukan sesuai dengan tabel:

Nilai indikatorTingkat viral load
Tidak ada virus RNA yang terdeteksi (atau jumlah salinan kurang dari sensitivitas sistem uji)Normalnya, orang tersebut sehat atau analisis dilakukan selama masa inkubasi patologi
1,8 × 102–7,9 × 105 IU / mlViral load rendah. Menunjukkan infeksi, latensi, atau kemanjuran antivirus baru-baru ini.
8 × 102–2,3 × 107 IU / mlViral load sedang Biasanya dicatat dalam bentuk kronis HCV. Prognosis pengobatannya baik, sesuai dengan rekomendasi dokter
2,4 × 107 IU / ml dan lebih tinggiViremia tinggi. Komplikasi parah (hingga kanker hati) sangat mungkin terjadi

Untuk mendekripsi analisis secara akurat dan mencegah hasil yang salah, dimungkinkan untuk mengevaluasi data PCR kuantitatif hanya setelah mengidentifikasi penanda serologis PCR kualitatif. Dengan IFA, koefisien positif perlu diindikasikan. Juga pertimbangkan data pemeriksaan ultrasonografi, elastografi, dan biopsi, jika penelitian dilakukan.

Norma

Analisis kuantitatif PCR dilakukan hanya jika jumlah darah lain positif untuk hepatitis C.

Mendapatkan hasil negatif dimungkinkan dengan:

  • penyembuhan sendiri (dalam literatur medis ada statistik yang menurutnya sekitar 15% dari infeksi HCV tidak diperhatikan, sistem kekebalan manusia sepenuhnya menghilangkan virus);
  • tanggapan virologi dini (ketika mengevaluasi hasil selama terapi antivirus);
  • dalam hal data yang salah dari studi sebelumnya (tidak mungkin, karena ELISA, PCR berkualitas tinggi, dan tes hati biasanya ditentukan terlebih dahulu).

Ketika tes hepatitis C diberikan untuk menilai viral load, transkrip dilakukan oleh dokter. Dipercayai bahwa indikator normal adalah tidak adanya RNA HCV di dalam darah. Tetapi untuk mengecualikan infeksi laten, studi ini dianjurkan untuk diulang dalam beberapa minggu..

Jumlah darah menunjukkan hepatitis C

Sebelum memulai pemeriksaan diagnostik, Anda harus tahu persis jumlah darah yang menunjukkan HCV. Di satu sisi, ini akan memungkinkan pasien untuk menghindari biaya keuangan yang tidak perlu untuk analisis yang tidak perlu, di sisi lain, itu akan menghemat waktu.

Jadi, dengan hepatitis C, data berikut bersifat indikatif:

  • ELISA positif terlepas dari kelas antibodi yang terdeteksi; tetapi parameter ini dievaluasi dengan latar belakang hasil lain, karena beberapa fitur sistem kekebalan tubuh dapat memengaruhi keakuratan penelitian;
  • PCR kualitatif positif (sensitivitas dan spesifisitas metode mencapai 100%);
  • penentuan jumlah salinan virus selama PCR kuantitatif.

Tanda-tanda HCV tidak langsung adalah transaminase hati berlebih, bilirubin, leukositosis, percepatan ESR, adanya bilirubin dalam urin.

Ketika mendekode hasil, pengurangan diperhitungkan, karena hepatitis C ditunjukkan dalam analisis. Biasanya, viral load ditunjukkan dalam IU / ml atau IU / ml, dan virus RNA adalah akronim bahasa Inggris RNA HCV.

Apakah ada tes yang salah

Berbeda dengan ELISA, probabilitas hasil PCR palsu praktis nol. Kesalahan hanya mungkin terjadi karena faktor manusia, yaitu, melanggar aturan pengambilan sampel darah, penyimpanan sampel, dan secara langsung melakukan penelitian..

Manfaat Kuantifikasi PCR

Spesialis di bidang hepatologi menekankan bahwa PCR kuantitatif tidak memiliki analog dan merupakan salah satu studi utama untuk pasien dengan HCV. Mesin analisis meminimalkan kemungkinan hasil positif palsu atau negatif palsu..

Butuh beberapa hari untuk mendapatkan hasilnya. Pengambilan sampel darah tidak memerlukan persiapan khusus, hal ini dimungkinkan di hampir semua laboratorium klinis dan tidak disertai dengan rasa sakit yang signifikan. Namun keunggulan utama dari analisis ini adalah akurasinya yang tinggi, mencapai 100%.

Analisis PCR kualitatif untuk hepatitis C

Ahli hepatologi

Spesialisasi terkait: ahli gastroenterologi, terapis.

Alamat: St. Petersburg, Akademisi Lebedev St., 4/2.

Hepatitis adalah penyakit serius yang memiliki banyak penyebab. Di jantung perkembangannya adalah kerusakan hati langsung atau tidak langsung. Mengingat pentingnya bagi seluruh organisme, kita hanya bisa menebak betapa sulitnya patologi itu. Pada artikel ini, kami akan menganalisis secara lebih rinci kursus dan diagnosis laboratorium hepatitis C.

Penyebab penyakit ini adalah agen virus, yang merujuk pada patogen yang mengandung RNA. Ini memiliki fitur khas - kemampuan untuk bermutasi, yaitu mengubah strukturnya. Karena hal ini, infeksi tersebut terhindar dari serangan sistem kekebalan tubuh dan dalam kebanyakan kasus menyebabkan peradangan kronis di hati.

Mengingat adanya berbagai subtipe virus, pemilihan obat harus dilakukan dengan mempertimbangkan hasil genotipe. Meskipun penelitian yang panjang tentang penyakit dan fitur struktural HCV, belum dimungkinkan untuk mengembangkan vaksin spesifik terhadap penyakit.

Kesulitan dalam diagnosis dini adalah hepatitis tanpa gejala, sebagai akibatnya seseorang pergi ke dokter pada tahap sirosis. Untuk mendeteksi penyakit pada waktunya, diperlukan pemeriksaan medis berkala. Hanya melalui tes darah laboratorium dimungkinkan untuk mendeteksi HCV dan mencegah infeksi orang lain. Faktanya adalah bahwa pembawa infeksi untuk waktu yang lama tidak dapat menebak tentang patologi dan terus menularkan virus ke orang sehat..

Cara transmisi

Virus dalam banyak kasus menyebar melalui darah, karena mengandung konsentrasi agen patogen tertinggi. Dengan demikian, infeksi ditularkan:

  • dengan hemodialisis;
  • ketika disuntik dengan jarum yang terinfeksi;
  • dalam proses perkelahian, ketika kulit terluka, dan kontak darah terjadi;
  • dengan transfusi darah (transfusi darah).

Kemungkinan infeksi keintiman dapat diabaikan, karena sperma dan keputihan mengandung sejumlah kecil patogen. Risiko infeksi meningkat secara signifikan dengan pelanggaran integritas mukosa genital. Ini diamati dengan seks agresif dan anal.

Adapun metode vertikal penularan infeksi, itu dilakukan dalam proses persalinan. Pada masa kehamilan, patogen tidak dapat menembus plasenta ke embrio. Dalam kelahiran alami, agen patogen ditularkan ke anak ketika kulitnya terluka ketika kontak dengan darah ibu diamati..

Setelah patogen memasuki tubuh yang sehat, sintesis antibodi dimulai, yang merupakan perlindungan terhadap infeksi dan milik struktur kekebalan tubuh. Mereka ditemukan selama studi awal seseorang menggunakan ELISA.

Untuk mengkonfirmasi diagnosis, pasien mengalami reaksi berantai polimerase. Ini adalah analisis untuk mengidentifikasi bahan genetik dari agen patogen dan menentukan viral load..

Diagnosis laboratorium hepatitis C

Diagnosis laboratorium dimulai dengan uji imunosorben terkait-enzim. Tugas utamanya adalah untuk mendeteksi antibodi yang dihasilkan terhadap patogen. Efektivitasnya hampir 95%. Berkat penelitian ini, pada tahap praklinis, dimungkinkan untuk mengidentifikasi pembawa virus dan mengirimkannya untuk pemeriksaan lebih lanjut.

ELISA kualitatif menunjukkan ada atau tidak adanya imunoglobulin dalam darah pasien. Hasilnya mungkin "positif" atau "negatif". Setelah menerima jawaban pertama, orang tersebut dikirim ke ujian berikutnya - PCR. Harganya tergantung pada kualitas reagen dan laboratorium. Biaya reaksi berantai polimerase dapat mencapai 4 ribu rubel.

Fitur PCR

Menggunakan reaksi berantai polimerase, bahkan sejumlah kecil bahan biologis memungkinkan kita untuk memperkirakan viral load dalam darah, yaitu, untuk menghitung konsentrasi patogen dalam satu mililiter cairan.

Dengan munculnya PCR, diagnosis hepatitis menjadi lebih sederhana. Analisis ini memungkinkan untuk mengidentifikasi RNA HCV, menetapkan tahap proses infeksi dan infeksi pada pembawa virus..

Ada beberapa jenis diagnosis genetik:

  1. analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C - mengkonfirmasi ada atau tidak adanya HCV dalam darah subjek:
  2. kuantitatif, terima kasih Anda dapat menghitung konsentrasi virus dan menentukan stadium penyakit. Hasilnya diberikan dalam IU / ml atau salinan / ml (tergantung pada laboratorium);
  3. genotyping - diperlukan untuk menentukan genotipe HCV. Ini diperlukan untuk pemilihan obat yang akurat yang akan paling efektif dalam kasus ini. Analisis secara tidak langsung menunjukkan tingkat keparahan proses patologis di hati. Jadi, dengan genotipe patogen ketiga, steatosis paling sering diamati, perkembangannya didasarkan pada akumulasi lemak dalam hepatosit (sel-selnya). Selain itu, jenis virus mempengaruhi hasil dan lamanya kursus terapi..

Analisis PCR kualitatif untuk hepatitis C

Pertama-tama, di laboratorium, bahan biologis diperiksa untuk keberadaan RNA HCV. Penting untuk diingat bahwa analisis kualitatif untuk hepatitis C memiliki tingkat sensitivitas tertentu, dan karena itu tidak selalu dapat memberikan jawaban yang benar. Dalam hal ini, diagnosis laboratorium berulang menggunakan reagen lain dianjurkan..

Untuk mendapatkan hasil yang andal, sistem uji dengan sensitivitas minimal 50 IU / ml harus digunakan..

Hasil diagnostik dapat berupa "positif" atau "negatif". Jika patogen tidak ditemukan dalam darah, penelitian berakhir. Jika agen patogen terdeteksi dalam sampel, perhitungan kuantitatif dari viral load dilakukan..

Jawaban negatif palsu diperoleh ketika proses teknologi dilanggar, misalnya, komponen aktif yang menghambat pembuatan salinan patogen memasuki lingkungan. Dengan demikian, tidak mungkin untuk menampilkan gambar sebenarnya dari darah, karena infeksi manusia tidak didiagnosis..

Hasil positif palsu dapat diperoleh jika tabung reaksi untuk mengumpulkan bahan biologis, serta lingkungan untuk penelitian terkontaminasi. Selain itu, tanggapan analisis semacam itu dimungkinkan dengan infeksi campuran, ketika hati dipengaruhi oleh beberapa virus, misalnya, hepatitis C dan D..

Indikasi untuk Penelitian Kualitatif

Dokter dapat meresepkan penelitian kualitatif kepada pasien untuk identifikasi RNA virus hepatitis C:

  • setelah menerima respons immunoassay enzim positif atau ragu;
  • untuk memverifikasi diagnosis;
  • penentuan viral load;
  • pengaturan stadium penyakit;
  • diagnosis infeksi campuran. Hepatitis C sering mempengaruhi hati secara bersamaan dengan virus D;
  • penentuan taktik terapi berdasarkan pada genotip patogen;
  • penilaian dinamika perubahan selama pengobatan dengan obat antivirus.

Manfaat reaksi berantai polimerase meliputi:

  1. sensitivitas tinggi dari teknik ini, yang memungkinkan untuk menetapkan fakta infeksi pada tahap praklinis;
  2. identifikasi bahan genetik patogen, dan bukan antibodi terhadapnya;
  3. kemampuan untuk membangun subtipe agen patogen;
  4. kecepatan diagnostik yang tinggi, karena tidak perlu untuk menyemai bahan pada media nutrisi, tetapi cukup untuk menggunakan sistem uji khusus. Seseorang mendapatkan hasilnya setelah 5 jam;
  5. keuniversalan. Analisis ini memungkinkan Anda mengidentifikasi materi genetik (RNA, DNA). Berkat ini, dokter dapat mengonfirmasi hepatitis C dan jenis penyakit lainnya (B);
  6. kemungkinan mendeteksi infeksi laten.

Penelitian kuantitatif

Dalam tes darah menggunakan reaksi berantai polimerase, dimungkinkan untuk menghitung jumlah patogen dalam volume tetap bahan biologis. Indikator disajikan dalam IU / ml. Berkat analisis ini, dimungkinkan untuk menetapkan tingkat infektivitas pasien, menentukan tahap proses infeksi, dan juga mengevaluasi efektivitas terapi obat..

Berdasarkan PCR, spesialis memutuskan dosis obat mana yang dapat memblokir multiplikasi patogen. Selain itu, durasi pengobatan antivirus dan prognosis seumur hidup ditentukan. Penting untuk diingat bahwa sistem uji sangat sensitif, oleh karena itu metode ini memungkinkan untuk mengkonfirmasi infeksi seseorang bahkan pada tahap praklinis..

Genotipe

Mengingat kemampuan patogen untuk bermutasi, genotipnya diperlukan untuk menentukan taktik pengobatan dan memilih obat antivirus. Sebagai contoh, pengobatan untuk HCV 1 hepatitis berlangsung selama 48 minggu, dengan dinamika positif diamati hanya pada 60% kasus. Genotipe 2 dan 3 memiliki prognosis yang lebih baik. Obat antivirus diresepkan selama 8 bulan, dan efektivitasnya mencapai 85%.

Menurut statistik, dalam sebagian besar kasus, HCV 1, 2, dan 3 dicatat di Federasi Rusia.

Saat mendekode tes laboratorium, jawaban seperti itu mungkin ditunjukkan - "tidak diketik." Ini berarti bahwa virus bersirkulasi dalam sistem peredaran darah pasien yang tidak dapat dikenali oleh sistem pengujian. Hasil analisis dalam kasus ini menunjukkan infeksi seseorang dengan patogen atipikal untuk wilayah geografis tertentu.

Cara mendapatkan hasil yang andal?

Agar penelitian PCR kualitatif untuk mendeteksi RNA dari patogen hepatitis C untuk menunjukkan hasil yang benar, perlu mematuhi persyaratan untuk persiapan diagnosis laboratorium:

  1. pengambilan sampel darah dilakukan dengan perut kosong, dan periode "lapar" tidak boleh lebih pendek dari 8 jam;
  2. dua hari sebelum penelitian, disarankan untuk berhenti minum alkohol dan menolak makanan pedas, berlemak dan merokok;
  3. membatalkan pengenalan obat yang mengurangi pembekuan darah, misalnya, heparin. Jika obat-obatan ini diresepkan untuk alasan kesehatan, perlu untuk memperingatkan dokter tentang hal ini. Selain itu, dokter spesialis harus mewaspadai penggunaan obat lain yang dapat memengaruhi hasil tes laboratorium;
  4. pada malam pengumpulan bahan biologis, prosedur fisioterapi tidak boleh dilakukan dan dikenakan tenaga fisik yang berat.

Hasil analisis dapat dipengaruhi tidak hanya oleh orang yang mendonorkan darah, tetapi juga oleh faktor-faktor lain, yaitu:

  • pengambilan sampel darah yang buruk;
  • ketidakpatuhan dengan rekomendasi untuk pengangkutan bahan biologis;
  • pelatihan staf laboratorium yang tidak memadai;
  • ketidakpatuhan dengan teknik penelitian;
  • pengenalan antikoagulan (heparin) pada malam pengambilan sampel darah. Kelompok obat ini mengurangi koagulasi, sehingga memperlambat kerja reagen.

Di laboratorium yang berbeda, respons diagnostik mungkin sedikit berbeda, namun, kesalahan ini tidak memengaruhi hasil akhir penelitian..

Perhatian khusus diberikan pada jenis sistem pengujian yang digunakan di laboratorium. Reagen dengan sensitivitas tinggi sering lebih disukai. Ini penting untuk pasien dengan viral load rendah karena sulit dideteksi..

Seberapa sering pengujian laboratorium?

Reaksi rantai polimerase primer dilakukan untuk orang yang, ketika uji imunosorben terkait-enzim terdeteksi antibodi terhadap agen penyebab hepatitis. Dalam hal ini, diresepkan untuk mengkonfirmasi fakta infeksi seseorang dan menentukan stadium penyakitnya. Selain itu, analisis ini memungkinkan Anda untuk menentukan subtipe virus, yang sangat penting untuk pemilihan obat.

Periode berikutnya untuk pengujian laboratorium wajib adalah 3 bulan sejak dimulainya terapi antivirus. Diagnosis memungkinkan untuk mengevaluasi efektivitas obat-obatan, menyesuaikan dosis atau menggantinya.

Selain tes dasar, PCR juga dapat dilakukan pada 4 dan 24 minggu dari awal pengobatan. Prognosis positif penyakit dikonfirmasi oleh penurunan viral load setelah tiga bulan terapi. Jadi, misalnya, seharusnya turun dari 1 juta IU / ml menjadi beberapa ratus ribu.

Jika konsentrasi agen patogen dalam darah tetap pada tingkat yang sama atau sedikit meningkat, ini menunjukkan ketidakefektifan agen antivirus dan membutuhkan penggantian. Menggunakan PCR pada akhir perawatan, adalah mungkin untuk mengkonfirmasi pemulihan pasien.

Untuk menginterpretasikan hasil diagnosa laboratorium dengan benar, diperlukan konsultasi dengan hepatologis atau spesialis penyakit menular. Mengingat tingginya frekuensi tanggapan salah dalam ELISA, analisis ini digunakan secara eksklusif untuk skrining primer. Untuk pemeriksaan pasien yang lebih teliti, digunakan reaksi berantai polimerase..

Tes hepatitis C yang akurat

Diagnosis hepatitis C yang akurat hanya dilakukan di laboratorium melalui tes darah pasien. Ada beberapa teknik yang digunakan untuk ini:

  • uji immunosorbent terkait-enzim - ELISA, yang memungkinkan Anda untuk menentukan keberadaan antibodi terhadap hepatitis C. Pada berbagai tahap perkembangan penyakit, beberapa jenis antibodi terdeteksi dalam darah - IgM, IgG;
  • reaksi berantai polimerase - PCR adalah analisis 100% efektif dan akurat untuk hepatitis C, karena memungkinkan Anda untuk secara langsung mengidentifikasi RNA virus hepatitis C, dan bukan antibodi terhadapnya..

Dalam kondisi yang berbeda, kedua studi ini dapat memberikan hasil tes positif palsu dan negatif palsu, sehingga untuk diagnosis yang paling akurat, hanya dengan menggabungkan hasil ini dapat memberikan gambaran diagnosis yang akurat. Jika metode ELISA memberikan hasil positif, maka analisis PCR untuk hepatitis C pasti dilakukan.Jika juga memberikan hasil positif, diagnosis dikonfirmasi, dan pasien diberitahu bahwa ia menderita hepatitis C. Jika tes ELISA positif, dan PCR negatif, itu artinya seseorang itu sehat! Seringkali ini terjadi setelah pengobatan hepatitis C atau setelah transfer hepatitis C dalam bentuk akut, yang sepenuhnya disembuhkan oleh tubuh.

Kasus seperti itu juga terjadi. Sekitar 15-20% pasien dapat sakit tanpa menyadarinya, dan tanpa melakukan upaya untuk pemulihan mereka sendiri!

Setelah pengobatan hepatitis C, tes PCR dilakukan secara teratur selama satu tahun untuk memeriksa tanggapan virologi yang stabil. Selain tes darah kualitatif oleh PCR, tes darah untuk viral load dan genotipe virus hepatitis C dilakukan. Nilai normalnya adalah tidak adanya viral load. Genotipe virus setelah perawatan dapat berubah. Ini menunjukkan bahwa genotipe yang ada telah berhasil disembuhkan, tetapi sekarang yang lain perlu diobati. Ada beberapa kasus ketika pasien memiliki tiga genotipe hepatitis C. Ini membutuhkan pengobatan jangka panjang yang serius. Analisis genotipe virus hanya menunjukkan keberadaan genotipe virus hepatitis C yang berlaku dalam darah.

Hepatitis C, bagaimana cara mengalahkannya?

Untuk mengalahkan hepatitis C, Anda tidak perlu duduk dan berharap untuk keajaiban atau pengobatan alternatif, tetapi pergi ke klinik hepatologi di mana dokter yang berpengalaman mengobati hepatitis C. Pengalaman seorang dokter sangat penting dalam keberhasilan terapi, karena hanya teori dalam pengobatan penyakit virus yang kompleks ini tidak cukup! Saat ini, selain metode klasik untuk mengobati virus hepatitis C - Interferon dan Ribavirin, rejimen pengobatan terbaru dari obat generasi baru digunakan - Harvoni. Ini adalah produk perusahaan farmasi dari Amerika, yang mencakup dua obat baru - Sofosbuvir dan Ledipasvir. Mereka memiliki efek yang sama sekali berbeda pada virus, yang memungkinkan untuk perawatan yang cepat dan efektif..

Hepatitis C dan sembelit

Virus hepatitis C menyebabkan gangguan pada saluran pencernaan. Pasien mungkin mengalami mual, kepahitan di mulut, mulas, gangguan tinja - diare atau sembelit, serta kembung dan perut kembung.

Analisis kualitatif untuk hepatitis C: transkrip

Penyebab perkembangan virus hepatitis C adalah infeksi oleh patogen yang termasuk dalam keluarga Flaviviridae. Antara infeksi dan awal produksi antibodi, interval waktu yang lama terdeteksi, yang tidak memungkinkan diagnosis penyakit secara tepat waktu melalui uji imunosorben terkait-enzim.

Analisis PCR untuk hepatitis C, biokimia, OAC, tes fungsi hati dilakukan jika infeksi dicurigai. Dengan reaksi berantai polimerase, virus dapat dideteksi dalam darah bahkan pada minggu pertama infeksi, yang merupakan keunggulan dominan dari metode ini..

Analisis kuantitatif dan kualitatif untuk hepatitis C dan fitur penelitian, bagaimana mempersiapkan, apakah ada kesalahan, decoding - kami akan mempertimbangkan secara rinci.

Apa metode reaksi berantai polimerase??

Polymerase chain reaction - teknik penelitian molekuler untuk menentukan bahan genetik dari agen virus sejak hari pertama infeksi. Analisis ini ditandai dengan tingkat keandalan, spesifisitas, dan akurasi yang tinggi. Berkat itu, tidak hanya ketiadaan / kehadiran virus yang terdeteksi, tetapi juga viral load (nilai kuantitatif), genotipe.

Penelitian ini membutuhkan darah pasien, di mana RNA infeksi virus seharusnya berada. Dalam kondisi laboratorium, primer ditambahkan ke cairan biologis - ini adalah fragmen artifisial buatan dari gen yang diinginkan berukuran kecil. Plus RNA polimerase adalah enzim khusus yang memperbanyak konsentrasi bahan yang diinginkan..

Selanjutnya, darah dengan penambahan komponen dipanaskan dan didinginkan beberapa kali dalam perangkat khusus. Kemudian muncul analisis hasil yang diperoleh, perbandingan dengan gen yang diketahui dari agen virus. Berdasarkan ini, kesimpulan dibuat tentang penyakit.

Jenis Penelitian PCR

Analisis PCR hepatitis C dilakukan di laboratorium dengan penambahan reagen yang diperlukan, memiliki tiga varietas dengan karakteristik berbeda:

  1. Analisis PCR kualitatif untuk hepatitis C adalah langkah pertama dalam penelitian ini. Melalui itu, materi genetik patogen terdeteksi dalam serum darah.
  2. Sebuah penelitian kuantitatif memungkinkan Anda menilai viral load - ini adalah konten materi viral dalam 1 ml darah pasien. Itu dilakukan sebelum dimulainya pengobatan, dan kemudian setelah 1-4-12 minggu terapi. Ketika kursus panjang, studi harus dilakukan setelah 24 minggu terapi untuk mengevaluasi efektivitasnya.
  3. Genotipe. Penyakit menular berkembang pesat, virus cenderung bermutasi. Oleh karena itu, perlu untuk mengidentifikasi genotipe virus.

Para ilmuwan telah mengidentifikasi 7 genotipe virus. Di Federasi Rusia, 1-2-3 spesies sangat umum.

Masing-masing genotipe ditandai oleh resistensi terhadap pengobatan..

Misalnya, dengan tipe 1, efektivitas terapi adalah sekitar 60%, dibandingkan dengan 2-3 jenis, indikatornya mencapai 85%.

Untuk memilih obat yang tepat, lamanya pengobatan, perlu untuk mengidentifikasi tidak hanya fakta infeksi, tetapi juga konsentrasi virus, genotipnya.

Indikasi untuk

Penanda untuk hepatitis, PCR dan ELISA, penelitian lain memiliki indikasi medis tertentu:

  • Ketika pasien memiliki riwayat infeksi HIV, AIDS.
  • Kontak dengan orang yang terinfeksi karena virus hepatitis sangat menular.
  • Gejala sirosis hati - hepatomegali, peningkatan ukuran limpa, pola vena muncul di perut, dll..
  • Klinik gangguan hati fungsional - nyeri periodik / konstan pada hipokondrium kanan, kulit menguning, mual.
  • Nilai AST dan ALT yang tinggi dalam biokimia darah.
  • Selama kehamilan, ketika tes fungsi hati yang buruk.
  • Sebelum memulai program antivirus untuk menentukan viral load.
  • Untuk memantau efektivitas terapi.
  • Setelah terapi untuk mencegah kekambuhan infeksi virus.

PCR dilakukan dengan diagnosis hepatitis B yang dikonfirmasi untuk mengecualikan bentuk campuran kerusakan hati.

Persiapan studi dan pengambilan sampel materi

Bagaimana mempersiapkan analisis, dokter akan memberi tahu. Untuk mendapatkan hasil yang akurat, pasien disarankan melakukan persiapan. Ini terdiri dari rekomendasi berikut:

  1. Analisis harus dilakukan di pagi hari, dengan perut kosong. Diijinkan untuk minum hanya air bersih non-karbonasi sebelum pengambilan sampel darah. Makan terakhir - 8 jam sebelum pagar.
  2. Jika Anda tidak dapat lulus tes di pagi hari, ini dapat dilakukan di malam hari atau saat makan siang, yang paling penting - 5-6 jam setelah makan, tidak lebih awal.
  3. 48 jam sebelum penelitian, berhenti minum alkohol, minuman berkafein, jus.
  4. Selama 2 hari Anda harus mengikuti diet, tidak termasuk semua produk berbahaya. Namun, beberapa dokter percaya bahwa makanan berlemak dan digoreng tidak mempengaruhi keakuratan studi PCR..

Jangan minum obat 24 jam sebelum manipulasi medis. Jika ini tidak memungkinkan, beri tahu penyedia layanan kesehatan Anda. Analisis tidak direkomendasikan untuk dilakukan segera setelah USG, CT, pijat, dan prosedur fisioterapi lainnya.

Pengambilan sampel darah adalah sebagai berikut:

  • Dengan menggunakan tourniquet khusus yang dikencangkan pada lengan pasien, dokter menghentikan aliran darah vena. Vena menjadi lebih terlihat, yang memfasilitasi prosedur untuk memasukkan jarum, setelah pengambilan sampel darah.
  • Area kulit sebelum dimasukkannya jarum steril dirawat dengan cairan yang mengandung alkohol.
  • Sebuah jarum dimasukkan ke dalam vena, setelah itu sebuah tabung melekat padanya, ke mana darah masuk.
  • Setelah memasukkan jarum, tourniquet dilepas. Kumpulkan jumlah darah yang diperlukan, lepaskan jarum.
  • Kapas yang dicelupkan ke dalam alkohol diterapkan ke tempat suntikan..

Untuk mencegah pembentukan memar di tempat injeksi, cotton bud perlu ditekan dengan kuat pada bagian yang terluka, bengkokkan lengan Anda dan tahan dalam posisi ini selama 3-4 menit..

Jika pasien menggunakan obat yang membantu mengencerkan darah (Aspirin, Warfarin), mungkin ada masalah tertentu dengan menghentikan pendarahan..

Keuntungan PCR dibandingkan tes lainnya

Metode reaksi berantai polimerase memiliki keunggulan tertentu dibandingkan metode diagnostik lainnya..

Keuntungan dari penelitian ini disajikan dalam tabel:

Diagnosis langsung patogenStudi lain memberikan jawaban - apakah ada patogen di dalam tubuh atau tidak. Tetapi menggunakan metode PCR, Anda dapat secara spesifik menetapkan jenis agen viral.
Kekhususan studiPCR menentukan fragmen DNA unik yang hanya sesuai dengan satu jenis agen virus. Ini meminimalkan kemungkinan kesalahan..
Sensitivitas tinggiBahkan konsentrasi kecil virus dalam darah dapat dideteksi..
Identifikasi semua patogenSelama penelitian, Anda dapat mendeteksi semua agen patogen.
Infeksi tersembunyiSelain patogen virus, dimungkinkan untuk mengidentifikasi infeksi yang memiliki perjalanan laten, yang ditandai dengan aktivitas antigenik yang tinggi..

Ketika pasien menerima hasil positif, ini berarti bahwa materi genetik patogen hepatitis telah terdeteksi dalam cairan biologis. Hasil negatif - tidak ada jejak virus.

Menguraikan hasil

Dokter harus mendekripsi hasil berdasarkan kesimpulan yang diterima pasien di laboratorium. Penting untuk menganalisis data bersama dengan indikator biokimia, OAC, ultrasound.

Kualitas

Sebuah penelitian kualitatif akan menunjukkan ada atau tidak adanya agen penyebab penyakit virus dalam darah manusia. Ada dua opsi - negatif (norma) atau hasil positif.

Bentuknya terkadang mengatakan: terdeteksi atau tidak ditemukan.

Hasil positif - asisten laboratorium mengungkapkan bahan genetik dari agen virus dalam darah pasien, infeksi dikonfirmasi. Kesimpulan negatif - tidak ada infeksi, fragmen RNA virus berada di bawah batas sensitivitas.

Kuantitatif

Analisis kuantitatif menyiratkan beberapa opsi hasil. Untuk kenyamanan, kami akan menyajikannya dalam bentuk tabel.

HasilDekripsi
NegatifIni adalah norma untuk orang yang sehat. Oleh karena itu, bahan biologis yang diteliti tidak mengandung viral load hepatitis RNA, atau kontennya kurang dari ambang kerentanan.
Hingga 1,8 * 10 ^ 2 IU / mlDikatakan bahwa konten RNA kurang dari rentang kuantifikasi. Hasil ini harus ditafsirkan dengan hati-hati, karena dianggap kontroversial. Selain itu, penelitian lain dilakukan untuk perbandingan selanjutnya. Tes PCR juga diulang..
Hingga 8 * 10 ^ 5 IU / mlViral load rendah. Sebagai aturan, hasil seperti itu berarti bahwa perawatannya efektif..
Dari 8 * 10 ^ 5 IU / mlViral load tinggi. Pengobatan diperlukan segera (jika tidak dilakukan), atau koreksi obat diperlukan.
2,4 * 10 ^ 7 IU / mlRNA lebih besar dari maksimum kuantifikasi atas. Terhadap latar belakang hasil seperti itu, viral load tidak dinilai. Diperlukan pengenceran berulang dari sampel cairan tubuh..

Genotipe

Hasil - asam ribonukleat dari genotipe tertentu terdeteksi. Selain itu menunjukkan genotipe dan subtipe, asisten laboratorium mengkodekan kesimpulan dalam huruf dan angka Latin. Misalnya, genotipe 1a. Sebanyak 7 genotipe, 67 subtipe.

Hasil - viral hepatitis C RNA terdeteksi - ini adalah DNA dari genotipe langka yang tidak dapat dikaitkan dengan agen virus umum, oleh karena itu, diperlukan diagnostik tambahan.

Ketika PCR negatif dan ELISA positif

Ahli hepatologi atau spesialis penyakit menular mendekripsi kesimpulan dari asisten laboratorium. Selalu ada risiko menerima hasil negatif palsu atau positif palsu. Kadang-kadang terjadi bahwa PCR negatif, dan ELISA positif.

Ini berarti bahwa saat ini tidak ada virus dalam darah pasien, tetapi ia menderita penyakit akut. Secara umum diterima bahwa ELISA menunjukkan antibodi yang diproduksi oleh sistem kekebalan setelah menyerang patogen..

ELISA dibandingkan dengan PCR ditandai dengan rendahnya keandalan dan keandalan, oleh karena itu, digunakan sebagai penyaringan utama. Ketika mendiagnosis virus hepatitis tanpa reaksi berantai polimerase tidak dapat dilakukan.

Biaya tes hepatitis C

Anda dapat mengambil tes di rumah sakit, di mana pasien diamati, jika ada laboratorium sendiri, atau hubungi pusat pribadi untuk biaya.

Dalam waktu singkat, Anda bisa mendapatkan hasilnya di pusat-pusat laboratorium seperti Hemotest, Invitro, Helix.

Biaya penelitian tergantung pada laboratorium:

Nama Layanan LabKebijakan harga
Spiral· Biaya pengumpulan bahan biologis - 170 rubel.

· Uji PCR kualitatif + kuantitatif - 3990 rubel.

· Identifikasi antibodi penyakit virus - 1500 rubel (2-3 hari).

· Memeriksa aktivitas virus sebelum memulai kursus terapi - 4090 rubel.

Invitro· Deteksi kuantitatif RNA virus hepatitis C dengan PCR - 3140 rubel.

· Asupan bahan biologis (darah vena) - 199 rubel.

· Penilaian viral load dengan deteksi waktu nyata - 18.000 rubel.

· Tes ultra-sensitif berkualitas tinggi - dari 3000 rubel.

· Genotyping - mulai 1250 rubel.

Hemotest· Harga penelitian kuantitatif adalah 2200 rubel.

· Diagnostik berkualitas tinggi dari 700 rubel.

· Penentuan RNA patogen - dari 4000 rubel.

· Pengambilan sampel darah dari vena sekitar 150 rubel.

Durasi penelitian adalah rata-rata 2-3 hari. Di beberapa laboratorium ada layanan sebagai analisis mendesak, biayanya 1,5-2 kali lebih tinggi. Dimungkinkan juga untuk memanggil rumah spesialis medis untuk mendonorkan darah, dan menerima hasilnya melalui email atau secara langsung ketika menghubungi laboratorium..